Layton Kyouju to Eien no Utahime
Ano: 2009
Layton recebe uma carta da famosa cantora de ópera, Jenis Quatlane, convidando-os para assistir à sua mais nova apresentação. Ela também pede a Layton, Luke e Remi ajuda em um mistério, dizendo que sua amiga Melina morreu um ano atrás, mas retornou mais tarde como uma menina de sete anos afirmando ter encontrado o segredo da vida eterna, e que ela também sabia todos os segredos que somente a verdadeira Melina poderia saber. Naturalmente, o caso fascina Layton e seu aprendiz, então eles se dirigem à casa de ópera Crown Petone, mas Remi permanece em Londres, procurando por algumas garotas que desapareceram lá. A ópera era sobre um reino perdido, O Reino dos Imortais; outrora, havia uma bela rainha que amava música. Ela era amada por todos no reino. Mas um dia, a rainha ficou muito doente. O povo do reino se esforçou para encontrar uma cura, mas a medicina não pôde ajudar. A rainha finalmente faleceu, e logo depois, a cura foi completada: Uma poção para a imortalidade. O povo do reino lamentou profundamente a morte de sua rainha. A fim de encontrar a rainha reencarnada novamente, eles decidiram se tornar imortais, usando o recém-concluído elixir da imortalidade. O Reino de Abrosia ainda está em algum lugar neste mundo, esperando o retorno de sua rainha, e então, ela cantará para sempre. Após o término do espetáculo, um homem mascarado aparece e propõe algo à plateia: "Vamos jogar um jogo" - ele diz - "O vencedor terá a vida eterna. Os perdedores terão que morrer." Cabe a Layton e Luke entrar no jogo e descobrir o segredo da Vida Eterna. A história se passa entre os eventos dos videogames Professor Layton e o Último Espectro e Professor Layton e a Máscara do Milagre.